Descrizione
L’insegnamento ha l’obiettivo di fornire agli studenti una conoscenza di base delle principali tecniche biochimiche e delle metodologie utilizzate nell’ambito del DNA ricombinante.
Il corso intende inoltre mettere in evidenza il rapporto di complementarietà tra le strategie di clonaggio, la produzione di proteine ricombinanti, la loro purificazione e la successiva caratterizzazione strutturale e funzionale, con particolare attenzione all’analisi dell’attività enzimatica.
- Conoscenza e capacità di comprensione
Al termine dell’insegnamento, lo studente dovrà conoscere i principi teorici delle principali tecniche impiegate nel laboratorio biochimico e delle metodologie di base utilizzate per la manipolazione del DNA ricombinante. - Capacità di applicare conoscenza e comprensione
Lo studente dovrà essere in grado di utilizzare le conoscenze acquisite per scegliere un approccio sperimentale adeguato al clonaggio del DNA, alla produzione, alla purificazione e alla caratterizzazione delle proteine.
Tali competenze costituiranno inoltre una base utile per affrontare gli insegnamenti successivi, in particolare il Laboratorio Integrato di Biologia.
- Autonomia di giudizio
Al termine del corso, lo studente sarà in grado di riconoscere e comprendere i passaggi fondamentali di un protocollo sperimentale relativo al clonaggio di DNA plasmidico, alla produzione di proteine ricombinanti, alla loro purificazione e alla caratterizzazione strutturale e funzionale. - Abilità comunicative
Alla conclusione dell’insegnamento, lo studente avrà acquisito un lessico tecnico-scientifico adeguato e saprà esporre gli argomenti trattati con chiarezza, precisione e proprietà di linguaggio. - Capacità di apprendimento
Al termine del percorso, lo studente sarà in grado di riconoscere e comprendere le metodologie apprese in diversi contesti scientifici e applicativi, come articoli di ricerca, relazioni di laboratorio e protocolli sperimentali.
Cosa imparerai
Programma di Introduzione alle Tecniche di Laboratorio
Strategia di produzione di proteine ricombinanti; Clonaggio genico con enzimi di restrizione e di ligazione; Scelte di vettori e di ospiti di clonaggio; Amplificazione del DNA (polymerase chain reaction); Metodi di estrazione del DNA plasmidico; Elettroforesi del DNA; Elettroforesi capillare; Sequenziamento del DNA con metodo di Sanger.
Tecniche centrifugative e di ultrafiltrazione; Precipitazione e frazionamento in ammonio solfato; Tecniche di lisi cellulare e centrifugazione frazionata.
Elettroforesi in condizioni native e denaturanti (SDS-PAGE); Western blotting; Introduzione alle tecniche immunochimiche; Immunoprecipitazione, ELISA.
Dosaggio della concentrazione proteica; Saggi di attività enzimatica; Tabella di purificazione.
Introduzione alle tecniche cromatografiche; Introduzione alle tecniche cromatografiche; Cromatografia di esclusione molecolare; Cromatografia a scambio ionico; Cromatografia di interazione idrofobica e reverse phase; Cromatografia di affinità; HPLC ed FPLC; Valutare l’andamento di una purificazione.
Introduzione alla spettrofotometria e assorbimento in UV-vis; Spettroscopia di dicroismo circolare; Spettrofluorimetria; Tecniche di fluorescence resonance energy transfer (FRET).
Insegnante
Luca Caristina
Laurea in Scienze Biologiche – Indirizzo Biomolecolare
Abilitazione all’esercizio della Professione di Biologo
Aiuto studenti giovani e adulti a comprendere e utilizzare ciò che studiano, sviluppando un metodo efficace di apprendimento, approfondimento, autonomia e capacità di ragionamento.
Il mio approccio non si limita alla spiegazione dei contenuti: lavoro per aiutare lo studente a capire come imparare e perchè imparare, migliorando concentrazione e organizzazione mentale.
Grazie alla mia esperienza nella ricerca, nella scrittura e nella progettazione di sistemi complessi, sono in grado di semplificare anche i concetti più difficili, rendendoli chiari, accessibili e applicabili.
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